我国猪蓝耳病流行发生明显变化，科学防控走出防疫误区
2017-08-15哈兽维科
众所周知，猪高致病蓝耳病病毒（HP-PRRSV）是危害我国养猪生产的重要病原之一。2006年的“高热病”疫情在爆发初期就造成超过100万头猪只死亡，对我国养猪业造成重创。近年来，高致病蓝耳病（HP-PRRSV）在猪场又有抬头趋势，严重影响着猪群的健康水平。有学者证实我国蓝耳病流行发生新的变化。其中，2015年10月哈尔滨兽医研究所动物病原监测与流行病学研究团队就在《Journal of Virology》期刊发文首次证实2013-2014年中国已出现新的变异HP-PRRSV毒株，并在吉林、黑龙江等几个省份传播扩散，吉林省感染猪场的发病率为100％，死亡率为76.6％（230/300），说明该毒株致病性和致死率都很高。该重组HP-PRRSV同样由北美流行毒株类NADC30株与国内HP-PRRSV毒株进行遗传重组而成。但该重组变异株具有很强的致病性。另外，2017年6月中国农业大学动物医学院副院长杨汉春博士团队在《Infection, Genetics and Evolution》期刊上发表文章指出：重组2型PRRSV（称为TJnh1501）是由中国HP-PRRSV变异株类MLV与类NADC30发生重组后具有中等毒力的毒株已在中国开始传播。因此要重视蓝耳病流行的新变化，科学防控走出误区。
1、重组HP-PRRSV毒株遗传表征
哈尔滨兽医研究所动物病原监测与流行病学研究团队从吉林省、黑龙江省两个农场中分离得到具有代表性的JL580和HLJ58的开放阅读框5（ORF5）序列。使用PhyML 3.0版软件建立进化树分析，结果表明：这些病毒与中国传统的HP-PRRSV毒株相关性不大，属于谱系8（图1A）。相反，它们深深地嵌套在起源于加拿大，现在在美国和加拿大都很普遍流行的多样化谱系1中。值得一提的是，该毒株也与2008年美国分离得到的中等毒力毒株NADC30具有一定的相关性。此外，分析这种变异HP-PRRSV多样性的结构表明，从时间上推断该毒株是从加拿大到美国，然后到传入中国（图1B）。在中国，新的HP-PRRSV毒株不仅影响吉林和黑龙江，而且已波及到华中和华南地区，其中分离的毒株包括HENAN-XINX（登录号KF416327至KF416329），HENAN-HEB（KF416334），HENAN-JIAOZKF416333）和FJ1405（KM453701）。
在研究该病毒的遗传表征上，采用Marc-145细胞培养，分离得到JL580毒株并对PRRSV N蛋白单克隆抗体进行免疫荧光测定。序列比对显示：该变异株在非结构蛋白2（nsp2）中有三个间断不连续缺失（总共131个氨基酸），这与NADC30和MN184毒株相似但与中国传统HP-PRRSV毒株不同（图1C）。这些缺失可以用作分子标记，以区分类JL580 HP-PRRSV毒株和其他2型PRRSV毒株。重要的是，在ORF5区域，大部分变异氨基酸位于蛋白质的可变区，这说明JL580与中等毒力的NADC30更接近（图1D）。
在重组试验中，利用SimPlot v3.5.1软件对基因组500-bp进行同源重组比较。结果显示：JL580是类NADC30毒株与中国经典HP-PRRSV毒株重组的结果（图2A）。图谱显示存在6个重组断点：两个位于nsp2（核苷酸[nt] 3446和4549），其他位于nsp3（nt 5225），nsp7（nt 7244），ORF2a（nt 12572）和ORF4（nt 13648）。这些断点将基因组分为七个区域：四个与来自北美的PRRSV毒株（由NADC30代表）相同（图2B），其余三个与中国经典HP-PRRSV毒株密切相关（图2C）。这表明该毒株从美国传入后，与中国经典的HP-PRRSV毒株重组而获得遗传多样性。
2、重组HP-PRRSV致病性研究
哈兽研针对JL580的致病性试验：将14只6周龄PRRSV阴性仔猪随机分为3组，于生物安全实验室中饲养。A组仔猪（n= 5）：用JL580-F2（Marc-145传代细胞培养3 ϫ 104.0 50％病毒感染量[TCID50]，肌内（1ml）和鼻内（2ml）接种，共3ml/只）。B组仔猪（n= 5）：用JL580匀浆上清液（经0.45μm滤膜过滤、PT-PCR确定不含有伪狂犬病病毒、猪细小病毒、经典猪瘟病毒或2型猪圆环病毒感染），每只猪的JL580-F2感染量为3 ϫ 104.0拷贝。C组仔猪（n= 4）：模拟Dulbecco's改良Eagle's的方法，3ml/只进行注射。每天对试验动物进行观察记录。定期（感染后0、3、7、10和14天）采集血样，观察结果显示：A组和B组仔猪从第3天开始发热（图3A），并伴有明显的咳嗽、厌食和身体红斑和耳朵发绀的临床症状；A组和B组的仔猪分别在7~10天和10~14天内死亡（图3B）。在第3、7和10天收集的血清样品检测PRRSV呈阳性，从A组和B组的血清中对该病毒重新进行分离鉴定，并对ORF5区域进行测序以确认其原始病毒。对照组仔猪整个实验过程没有明显的临床症状。病理剖检结果显示肺部病变明显（图4C），镜下呈间质性肺炎（图4E）。试验结论：JL580的致病性比类NADC30和CH-1a株要高，与国内HP-PRRSV相类似。
3、现有疫苗依然是防控重组HP-PRRSV的有效手段
重组HP-PRRSV终究是一种PRRS病毒，对于重组HP-PRRSV的防控不需要引起恐慌，从PRRSV防控历史来看，新的毒株层出不穷，PRRS疫苗的不可能盖其所有，只要交叉保护力好，达到防疫效果不成问题。对于蓝耳病应继续保持综合防控的理念：对内通过疫苗免疫和生物安全降低病毒的循环；对外做好生物安全和引种管理。降低病毒在场内的循环，除了良好的生物安全和猪群流动的管理办法（全进全出、清群等管理模式），疫苗防疫是非常简单实用的操作手段。
来源：哈兽维科