2017-08-11永顺人生
副猪嗜血杆菌病又称革拉泽氏病，是由副猪嗜血杆菌（Hps）引起的猪的上呼吸道传染病，主要感染断奶前后仔猪，临床上表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎，对世界养猪业造成了巨大经济损失。随我国养猪业的快速发展，该病的流行愈发广泛，及时、快速和准确地诊断出该病以便及早地采取相应的应对措施，有助于该病的控制。
1.病原学检测
病原学检测是副猪嗜血杆菌病的经典诊断方法，该方法是根据临床症状、剖检病变进行细菌分离培养鉴定。副猪嗜血杆菌病的主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行。主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、多关节炎和脑膜炎，心包积水，腹膜积水等。Hps的培养条件苛刻，生长过程需要额外的NAD（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）和血清，其分离培养的常规操作是将临床病料接种到血琼脂平板或TSA固体培养基上（含NAD和血清）进行纯化培养鉴定。
2.血清学检测
临床上用于检测副猪嗜血杆菌抗体的方法有补体结合试验（CF）、间接血凝试验（IHA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。
补体结合试验 使用CF进行血清学检测发现各种血清型之间具有广泛的交叉反应，而且操作复杂，影响因素繁多，现已被其他方法取代。
间接血凝试验 该方法操作方便，结果肉眼可见，但也存在一些缺点，如不同批次制备的抗原或抗体可使结果的敏感性和稳定性不一致，以及容易受到外界杂质污染而造成非特异性凝集。
酶联免疫吸附试验 ELISA检测方法敏感性高、稳定性好、操作简便、快速，可用于大批量的抗原或抗体样品的检测，临床应用优于前两者。其包被抗原的选择必须是具有特异性的。建立Hps抗体间接ELISA方法所用的抗原通常为灭活的Hps全菌、Hps菌体超声裂解上清和表达纯化的Hps蛋白（如omp P2、P2和耐热蛋白等）。
血清学检测只能作为猪群是否感染过副猪嗜血杆菌的诊断依据，而不能作为诊断该病的依据，在临床诊断中，除了观察猪群临床症状、病原分离鉴定等传统方法，分子诊断技术也在不断地发展。
3.分子生物学检测
常规PCR PCR方法是实验室常用的分子生物学诊断方法，因其检测的灵敏度高、特异性强、快速、简便等优点，在副猪嗜血杆菌病的诊断上得到了十分广泛的应用。通常针对Hps的16S rRNA基因设计特异性PCR引物，建立副猪嗜血杆菌病的PCR检测方法。
实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR检测是一种新的技术，它是将光谱技术和PCR 技术相结合的一种核酸定量检测技术。与常规PCR 方法相比，实时荧光定量PCR检测可以定量起始DNA 模板的拷贝数，反应时间短，灵敏度比普通PCR 提高100倍，并能减少假阳性发生的几率，特异性更高，检测结果更为直观。通常根据Hps的16S rRNA基因或转录起始因子infB 基因的保守序列，建立基于SYBR Green I 或TaqMan探针的检测Hps的实时荧光定量PCR 技术。
环介导等温扩增技术 环介导等温扩增技术（LAMP）最早是由日本学者Notomi 于2000年提出的新的基因诊断技术，目前已有一些病原微生物成功利用LAMP 检测，该方法灵敏度高，反应时间短，无需特殊仪器，操作简单，特别适合基层人员操作。选择Hps某个合适基因的保守区域设计LAMP特异性引物，可建立Hps的LAMP检测方法。在实际操作中，由于该检测方法灵敏度高，容易造成气溶胶污染而出现假阳性的结果。
4.展望
副猪嗜血杆菌病快速、准确的诊断方法不仅对于及时采取措施防控疫情蔓延至关重要，还有助于Hps流行菌株的监测，对副猪嗜血杆菌病新型疫苗的开发具有重要指导的意义，从而更有利于副猪嗜血杆菌病的防控。随着分子生物学的快速发展，一些新型的、应用性更为广泛的诊断方法将得到开发和推广应用，使人们能更快速、准确地诊断副猪嗜血杆菌病。
来源：永顺人生